最新公告: 操作鱼类Elisa试剂盒时需要注意的事项鱼类Elisa试剂盒操作步骤:1,试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。2,实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。3,不用的其它试剂应包装好或盖好。4,使用一次性的吸头以免交叉污染,避免使用带金属部分的加样器。5,使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6,洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。7,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。8,严格按照说明书的操作方
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简单介绍鸡ELISA试剂盒试验操作步骤
点击次数:19 发布时间:2017/12/26
 
   简单介绍鸡ELISA试剂盒试验操作步骤
  鸡ELISA试剂盒操作步骤:
  方法一用于检测未知抗原的双抗体夹心法
  1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
  2.加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
  3.加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
  4.加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
  5.终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
  6.结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
  方法二用于检测未知抗体的间接法
  1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;
  2.次日洗涤3次;
  3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;
  4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;
  5.37℃孵育30-60分钟,洗涤;
  6.’最后一遍用DDW洗涤。
  其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
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